قسمت های هوایی گیاه Otostegia persica در تاریخ ۲۰ خرداد۱۳۹۰ در نزدیکی بندر عباس جمع اوری شد. گیاه بعد از جمع آوری و شناسائی علمی ، پودر شده و عصاره تام متانولی آن به روش پرکولاسیون تهیه گردید. فراکسیونهای اتردوپترولی، کلروفرمی، اتیل استاتی،متانولی و آبی آن به ترتیب به روش پرکولاسیون از گیاه پودر شده تهیه شد. عصاره و فراکسیونهای بدست آمده تغلیظ و در نهایت خشک شده و جهت بررسی اثر ضد قارچی در ظروف تمیز، تیره و در جای خنک نگهداری شد. برای بررسی اثر عصاره و فراکسیونهای حاصل از گیاه بر روی قارچ هااز روش چاهک استفاده شده است.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

به این ترتیب که در چاهکهائی به قطر نیم سانتیمتر عصاره و فراکسیون­های مورد نظر ریخته شد و پس از آن قارچها کشت داده شد. جهت انجام عصاره های بدست امده از گیاه فوق رابه روش خیساندن تهیه نموده و پس از تبخیر حلال عصاره­ها را با غلظت­های ۲۰۰,۱۰۰,۵۰,۲۵,۱۲٫۵,۶٫۲۵ mgml با کمک حلال آب و اتانول ۹۶ تهیه گردید. سپس اثر ضد قارچی عصاره­ها به روش چاهک در محیط سابور دکستروز اگار و سابور حاوی کلرامفنیکل و سیکلوهگزامید بررسی شد. برای کنترل + از داروی ضد قارچ وبرای کنترل – از حلال استفاده شد.
بررسی روش های دیگر:
روش اختلاط:
برای انجام این روش بعداز اماده کردن محیط کشت غلظت های ml /100mg /ml, 200mg , 50mg/ml ,25mg/ml ,12.5mg/ml ,6.25mg/ml که در اب مقطر استریل حل کرده آماده کرده ودر محیط کشت گرم ریخته و هم زده ودر پلیت ها سوسپانسیون اماده از محیط کشت و عصاره را ریخته شده وگذاشته تا سرد شدو بعد از۲۴ ساعت قارچ های مورد نظر را روی محیط کشت اماده شده کشت داده شده است.
روش سوسپانسیون قارچ و عصاره گیاه:
برای انجام این روش غلظت های ذکر شده در بالا را که در ۱cc اب مقطر حل کرده ومقدار مشخصی از قارچ های مورد نظر رادر عصاره های اماده ریخته و ۱ ساعت سوسپانسیون را بحال خود رها کرده وسپس این سوسپانسیون راروی محیط کشت که قبلا اماده کرده و بسته شده ریخته و ۷روز بعد نتیجه بررسی شد.
نتایج:بر اساس بررسی های انجام شده در این ۳ روش اثر ضد قارچی این گیاه مشاهده نشد.
کلمات کلیدی: Otostegia persica‚چاهک ‚اثر ضد قارچی ‚سوسپانسیون
فصل اول
کلیات
۱-۱٫ضرورت و اهمیت موضوع
گیاهان اغلب منبع منحصر به فردی برای داروهای مصرفی جامعه بشری بوده اند و این داروها با منشأ طبیعی نقش مهمی در درمان بیماری ها به عهده دارند یکی از مشکلات مهمی که بشر از ابتدای خلقت با آن دست به گریبان بوده است، بیماریهای قارچی است و با توجه به عوارض نامطلوب و ناگوار داروهای صناعی، ضرورت دستیابی به ترکیبات طبیعی جدید با فعالیت ضد قارچی بیشتر احساس می گردد.
گیاه Otostegia persica (Burm.) Boiss از خانواده نعنا بوده با توجه به اینکه تا کنون هیچ گونه مطالعه قارچ شناسی روی آن انجام نگرفته است برآن شدیم تا در مطالعه ی حاضر برای اولین بار اثر ضد قارچی گیاه را با روش های استاندارد بصورت مقدماتی مشخص کرده و اثرات ضد قارچی آن را برروی۹ سوش قارچی
Microsporum gypseum, Epidermophyton foccosum, Trichophyton vorrocosum, Trichophyton mentagropheytes, Aspergillus fumigates, Aspergillus flavus, Microsporum canis, Trichophyton rubrum, Candida albicans.
بررسی نماییم.
۱-۲٫بیان مساله
کشور ایران با دارا بودن تنوع آب و هوایی و وجود تنوع اقلیمی در اقصی نقاط کشور دارای پوشش گیاهی متنوعی است. خصوصیات بسیاری از گیاهان این پوشش گیاهی تحت مطالعه قرار گرفته و این در حالی است که بر روی بسیاری، از آنها هنوز تحقیقی صورت نگرفته و اثرات آنها مشخص نیست.
از طرف دیگر داروهای سنتزی قادر به تسکین یا درمان کلیه مشکلات نمی باشند. امروزه بسیاری از داروهای گیاهی و طبیعی در رشته های گیاهی درمانی، هومیوپاتی، رایحه ی درمانی، گل درمانی و روش های طب مکمل دیگر، در حال استفاده وسیع بوده و میلیون ها نفر در جهان از آن استفاده می کنند همچنین داروهای مصنوعی به دلیل محدود بودن ماده ی مؤثره دارای اثر اختصاصی و اکثراً یک بعدی بوده در حالی که داروهای گیاهی در بر دارنده شمار فراوانی ماده بوده که به طور چند بعدی تأثیر نموده و ضمن ایجاد اثرات مختلف و مکمل دارای آثار جانبی کمی می باشند. چرا که تعداد زیادی از مواد موجود در گیاهان، مسئول کاهش یا از بین بردن عوارض جانبی هستند.
۱-در سال ۲۰۰۹ طی بررسی فیتوشیمیایی که بر روی بخش هوایی Otostegia persica انجام گرفت، ۴ دی ترپنوئید استخراج و تعیین ساختار شدند.
۲- در سال ۲۰۰۵ برای اولین باربر روی O.persica یک تحقیق فیتوشیمیایی انجام شد.۳ فلاونول کامپفرول ،morin و کورستین در این گیاه شناسایی شد. کامپفرول و کورستین آگلیکون فلاونول می باشند و بطور وسیعی در گیاهان پراکنده اند.(۳)
۳- طی بررسی که در سال ۲۰۱۰ انجام گرفت، اثر آنتی گلایکیشن این گیاه به اثبات رسید و یک فلاونوئید به نام اوپاتورین در این رابطه استخراج و تعیین ساختار گردید(۴).
۴- در سال ۲۰۱۰ اثر ضد دیابت این گیاه در موشهای دیابتی القا شده با استرپتوزوسین به اثبات رسید (۵).
۵- در سال ۲۰۰۴ اثر قابل توجه این گیاه بر سندرم محرومیت از مورفین ثابت شد (۶).
۶- در سال ۲۰۰۶ بررسیهای انجام شده، اثر قابل توجه آنتی باکتریال رانشان دادند (۷).
۱-۳٫هدف اصلی
بررسی اثر ضد قارچی عصاره تام متانولی و فراکسیون های اتردوپترولی، کلروفرمی، اتیل
استاتی ،متانولی و آبی بخش هوائی گلدار Otostegiapersica (Burm.) Boiss
فصل دوم
بررسی متون و مطالعات دیگران در این زمینه
بخش اول
کلیات گیاه شناسی
۲-۱-۱٫اختصاصات تیره‌ی نعنائیان (Lamiaceae) (8)
در تیره نعناع طبق بررسی‌های جدیدی که به عمل آمده ۴۰۰۰ گونه گیاه وجود دارد که در ۲۰۰ جنس جای داده شده‌اند. این گیاهان به وضعی در کره زمین پراکندگی دارند که در غالب نواحی یافت می‌گردند. ولی بیشینه انتشار آن‌ها در منطقه مدیترانه است.
گیاهانی عموماً علفی یکساله یا پایا و دارای ساقه‌های راست یا خزنده‌اند. بعضی از آن‌ها ظاهر بوته مانند و ساقه‌های متعدد و چوبی شده دارند. در بین آن‌ها به ندرت نمونه‌های پیچنده یا درختچه مانند ممکن است یافت گردد.
از مشخصات این گیاهان آن است که ساقه‌های چهارگوش دارند. از قاعده ساقه آن‌ها نیز غالباً ساقه‌های فرعی منشأ می‌گیرد که حالت خزنده در سطح زمین پیدا می‌کنند و یا درون خاک وارد گردیده به صورت ساقه‌ی زیرزمینی در می‌آیند. در انواع چند ساله‌ی این گیاهان، ساقه‌های مسن ظاهر مدور دارد و این نیز بر اثر پیدایش لایه‌ی زاینده‌ای در ناحیه‌ی پوست ساقه‌های بیرونی، از خارج می‌گردد و با این عمل، ظاهر چهارگوش ساقه را از بین می‌برد.
عده‌ی زیادی از گیاهان تیره نعناع، سریعاً تحت تاثیر شرایط متفاوت محیط زندگی قار می‌گیرند؛ مانند آنکه انواعی از آن‌ها که در دشت‌ها و اماکن مرطوب می‌رویند اگر در محیط‌های خشک قرار گیرند، به سرعت تغییراتی از نظر سازش و تطابق با محیط حاصل می‌کنند تا مقاومت آن‌ها در مقابل تعرق زیاد شود. بطوریکه برگ‌های آن‌ها پوشیده از کرک می‌شود، یا کنار پهنک برگ‌های آن‌ها به سمت پایین خمیدگی حاصل می‌کند و یا روزنه ها، به حالت فرو رفته در بشره باقی می‌ماند و یا ممکن است هیپودرم در آن‌ها به صورت کاملاً کلانشیمی درآید و یا برگ حالت نسبتاً ضخیم و چرمی پیدا کند و حتی ممکن است از سطح آن کاسته شود تا حدی که به کلی از بین برود.
گیاهان تیره نعناع عموماً برگ‌های متقابل و گاهی ساقه آغوش دارند. برگ‌های آن‌ها عموماً ساده است بطوریکه وجود برگ‌های مرکب در آن‌ها دیده نشده است. گل‌های آن‌ها کامل، منظم، نر- ماده و مجتمع به صورت دسته‌هایی واقع در محور ساقه یا در قسمت انتهایی آن است. در برخی از آن‌ها وضع اجتماع گل‌ها در قسمت‌های انتهایی ساقه به نحوی است که به علت فشرده بودن، ظاهر کاپیتول مانند پیدا می‌کنند. در انواع نادری از این گیاهان نیز گل‌ها به صورت منفرد بر روی ساقه ظاهر می‌گردند.
گیاهان این تیره از نظر کلی دارای کاسه‌ی منتهی به ۵ تقسیم و جام منتهی به ۵ لوب‌اند. ۴ پرچم دارند که در حول یک مادگی ۲ برچه‌ای قرار گرفته‌اند. وجود خطوط برجسته روی کاسه گل و ظاهر جام گل و ظاهر جام گل، کمک موثری در تشخیص این گیاهان می کند. جام گل این گیاهان معمولاً از گلبرگ‌های به هم پیوسته تشکیل یافته و شامل لوله‌ای است که در انتها به ۵ لوب ولی لب تحتانی (نیمه جام قدامی) مرکب از ۳ لوب یا دندانه می‌باشد ولی این حالت در همه آن‌ها عمومیت ندارد، زیرا حالات دیگری نیز در وضع جام گل مشاهده می‌گردد که تفاوت کلی آن را با آنچه ذکر شد نشان می‌دهد. از این جهت است که امروزه با توجه به مشخصات کلی جام گل، این گیاهان را به دسته‌ه ای متعدد تقسیم می‌نمایند.
پرچم غالب گیاهان تیره‌ی نعناع دارای وضعی خاص است بطوریکه میله‌ی دوتای آن‌ها بزرگ و دوتای دیگر کوچک است. این حالت را دی‌دینامی (Didynamie) گویند. در بین این گیاهان انواعی با پرچم‌های مساوی نیز وجود دارد. در بعضی از آن‌ها نیز، گل منحصراً دارای ۳ پرچم است.
مادگی این گیاهان از ۲ بر چه تشکیل می‌یابد که در آغاز، تخمدانی ۲ خانه و واقع بر روی دیسک (صفحه روی نهنج) بوجود می‌آورند ولی تدریجاً هر یک از ۲ خانه‌ی مذکور، بر اثر پیدایش جدارهای فرعی، تقسیم حاصل نموده و به ۲ خانه‌ی کوچک که در هر یک، یک تخمک آپوتروپ جای دارد تقسیم می‌شوند.
خامه‌ی مادگی این گیاهان که وضع متفاوت آن، بهترین وسیله‌ی رده‌بندی بعضی از گروه‌های این تیره به شمار می‌رود بر دو نوع است: یا منحصر به میله‌ای است که تخمدان را به کلاله مربوط می‌سازد و یا آنکه به درون تخمدان را به کلاله مربوط می‌سازد و یا آنکه به درون تخمدان راه یافته، به قاعده آن ارتباط پیدا می‌کند که در این حالت ژینوبازیک (gynobasigue) نامیده می‌شود.
میوه‌ی گیاهان تیره‌ی نعناع، ۴ فندقه‌ای و محتوای دانه‌های بدون آلبومن است و از مشخصات آن این است که معمولاً محصور در کاسه‌ی گل باقی می‌ماند. بعضی از این گیاهان نیز ممکن است به ندرت میوه‌ای به صورت شفت داشته باشد.
اختصاصات تشریحی: گیاهان تیره نعناع دارای اختصاصات کلی زیر از نظر مشخصات تشریحی می‌باشند:
انواع علفی آن‌ها عموماً دارای دسته‌ه ای کلانشیم در زوایای ساقه، زیر بشره‌اند. وجود این حالت باعث می‌گردد که ساقه‌ی این گیاهان، ظاهر ۱۴ گوش پیدا کند.
دسته‌ه ای چوب – آبکش پسین درآن‌هامعمولاًبه وضع غیرممتدوجداازهم دیده می‌شود.
بشره‌ی ساقه و برگ این گیاهان، غالباً پوشیده از تارهای ترشحی و غیره ترشحی به اشکال مختلف هستند.
تارهای ترشحی اسانس در آن‌ها دارای پایه یک یا دو سلولی، منتهی به یک برجستگی ۴ تا ۸ سلولی و حتی بیشتر است. اسانس ترشح شده نیز، معمولاً خارج از جدار سلولزی، در زیر کوتیکول جمع می‌گردد و این خود باعث می‌شود که بشره در همان ناحیه، کمی متورم جلوه نماید.
در بین گیاهان تیره نعناع گونه‌های مفید فراوانی وجود دارد که از عده‌ی زیادی از آن‌ها هنوز هم در پزشکی استفاده به عمل می‌آید. از بعضی از آن‌ها اسانس‌گیری می‌شود. عده‌ی زیادی از آن‌ها نیز مصارف تغذیه‌ای دارند (به حالت خام یا پخته) و یا به علت دارا بودن گل‌های زیبا و معطر، پرورش می‌یابند.
۲-۱-۲٫رده بندی گیاه Otostegia persica (Burm.) Boiss
شاخه (Phylum): پیدازادان
زیر شاخه (Sub Phylum): نهاندانگان
رده (Class): دو لپه‌ای